本制品是一种通过E.coli重组表达的包含人源SENP2的酶活结构域(Asp364-Leu589)和His标签的蛋白酶，理论分子量为26.8kDa，常用于体外去SUMO化修饰(DeSUMOylation)反应，或切除融合表达的重组蛋白的SUMO1、SUMO2或SUMO3标签。本制品N端带有His-tag，可以通过相应的抗体检测或通过镍柱吸附去除。
rSENP2不识别特定的氨基酸序列，而是高度特异性地识别人源SUMO1/2/3三维结构特征，并在其尾部QTGG/X氨基酸残基之间进行高效酶切，释放成熟形式的SUMO1/2/3，可用于体外去SUMO化修饰反应或移除融合表达的重组蛋白的SUMO标签。
人体中共有7种SENPs：SENP1、SENP2、SENP3、SENP5、SENP6、SENP7和SENP8，其中SENP8作用于泛素家族成员NEDD8，其余6种SENPs可以识别、切割并释放成熟形式的SUMO1/2/3用于SUMO化修饰，也可以去SUMO化修饰，即将连接到特定蛋白赖氨酸上的SUMO1/2/3切除(图1)。百奥莱博的SUMO Protease(货号：YTB4022)是一种来自Saccharomyces cerevisiae的高活性的半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl protease) Ulp1 (Ubiquitin-like protein-specific protease 1)基因片段的重组表达蛋白，可以水解SUMO羧基端(C端) x-Gly-Gly-x肽段中Gly-Gly后的肽键，和本制品识别的SUMO标签有所不同，不能相互替换。
图1.人源SENPs加工处理SUMO1/2/3和去SUMO化修饰示意图。
类泛素蛋白修饰分子(SUMO)，也被称为泛素样修饰因子小蛋白、泛素样小分子修饰因子或小泛素相关修饰物，是一个广泛存在于真核生物的蛋白家族。在人体中共有4种SUMO：SUMO1、SUMO2、SUMO3和SUMO4，长度约100aa，理论分子量约12kDa，在氨基酸水平SUMO1与SUMO2的相似度为43%，SUMO2与SUMO3的相似度为96%，SUMO2与SUMO4的相似度为87%。与泛素化(Ubiquitination)类似，SUMO通过类泛素蛋白(Ubiquitin-like proteins,Ubls)活化酶(Ubl activating enzyme,E1)、结合酶(Ubl conjugating enzyme,E2)和连接酶(Ubl protein ligase,E3)共价连接到特定蛋白的赖氨酸上，这一过程被称为SUMO化修饰(SUMOylation)。SUMO化修饰是一种翻译后修饰，参与细胞的调控，如细胞内转运、转录调控、细胞凋亡、蛋白质稳定性、压力应激和细胞周期等的调控等。
| 组分 | 500U | 2kU | 10kU | 50kU |
| rSENP2(10U/μL) | 50μL | - | ||
| rSENP2(100U/μL) | - | 20μL | 100μL | 500μL |
保存：-20℃，有效期2年。
本制品用于移除重组蛋白SUMO3标签酶切反应时，如果按照1mg SUMO3标签融合的重组蛋白使用1μL rSENP2 (100U/μl)在4℃酶切过夜，本制品的500U、2KU、10KU和50KU包装，分别可用于约5mg、20mg、100mg和500mg带有SUMO3标签融合重组蛋白的酶切。
SUMO3标签(SUMO3-tag)融合于目的蛋白N端已广泛应用于大肠杆菌体系的重组蛋白表达纯化，SUMO3标签作为分子伴侣辅助融合目的蛋白的折叠，增加重组蛋白的表达量，改善溶解性，保护目的蛋白不被降解。SUMO3标签与GST (Glutathione S-transferase)、MBP (Maltose binding protein)、Trx (Thioredoxin)、NusA (Transcription termination anti-termination factor)和DsbA (Protein disulfide isomerase I)等常用融合标签相比体积更小，而且不需要在融合标签和目的蛋白之间添加TEV (Tobacco etch virus)、EK (Enterokinase)或IIa (Thrombin)等蛋白酶酶切位点。SUMO3标签三维结构可以被rSENP2高特异性地识别，并在其尾部2个连续的Gly氨基酸残基处高效酶切，从而释放融合表达的目的蛋白，便于SUMO3标签的移除。重组SENP2蛋白酶(His-tag)酶切SUMO3标签融合蛋白的效果参考图2。
图2.重组人SENP2蛋白酶(His标签)酶切SUMO3标签融合蛋白的效果图。在20μL反应体系中，加入10μg SUMO3标签融合蛋白及1μL经100倍稀释的重组人SENP2蛋白酶(His标签)，37℃孵育1小时后，加入4μL 6×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，混匀后95℃加热5分钟，使用BoGel Plus PAGE预制胶进行电泳检测并使用考马斯亮蓝超快染色液染色。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。
- 本制品含50%甘油，-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存，冻融可能会降低本制品的酶活性。
- 本制品较为粘稠，吸取时需注意取样量准确，加样后请注意充分吹打混匀，避免产生气泡。
- 请仔细核对所使用的SUMO标签是否适合本制品。不同的SUMO标签可能需要使用不同的相应蛋白酶的。
- 本制品的酶活性与SUMO3标签和目的蛋白形成的融合蛋白的空间结构有较大的相关性，实测对于一些SUMO3标签融合蛋白的活性可以达到说明书标注的活性，但对于某些UMO3标签融合蛋白的酶切活性会差别比较大。对于遇到本制品酶活性相对较低的情况，需要大幅度加大酶的用量。如果希望获得更高的酶切活性，此时建议在许可的范围内适当增减目的蛋白与SUMO3标签连接处的氨基酸序列，以获得更好的酶切效果。
- 酶切条件的优化：由于不同SUMO3标签融合的重组蛋白具有不同的特性，为获得比较理想的实验效果，建议对酶和待酶切的SUMO3标签融合蛋白的使用比例进行适当优化，按照如下步骤摸索rSENP2的理想用量。
- 取1μL rSENP2 (100U/μL)加入到99μL Reaction Buffer (需用户自备)中，将rSENP2稀释至1U/μL。
- 由于rSENP2在较宽的pH范围(6.0-10.0)，较宽的温度范围(2～37℃)，较宽的离子强度范围(0-1M NaCl，0～500mM Imidazole)内均具有较高的酶活性，因此对Reaction Buffer组分不作特定限制，但是在0.5～2mM DTT存在的情况下rSENP2的酶活性更高，可根据实验需要决定酶切体系中是否加入适当浓度的DTT。
- 请参考下表在1.5mL离心管中配制反应体系。
成分 用量 SUMO3-tag Protein (10μg) xμL rSENP2(1U/μL) 0,1,5 or 10μL Reaction Buffer 至20μL - 进行酶切反应。温度与时间可以视情况进行适当调整，具体请参考下表。
温度 时间 4℃ overnight 16℃ 4h 25℃ 2h 37℃ 1h - 加入4μL 6×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，混匀后95℃加热5分钟，使用BoGel Plus PAGE预制胶进行电泳检测并使用考马斯亮蓝超快染色液染色。
- 观察考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶，SUMO3标签被完全切除是比较理想的rSENP2酶用量，可按照等比例放大应用到后续的酶切反应中。
- 如按照上述操作，SUMO3标签没有被完全切除，可以尝试增加rSENP2酶用量，延长酶切时间或提高酶切温度，以获得最佳的酶切效果。
- 取1μL rSENP2 (100U/μL)加入到99μL Reaction Buffer (需用户自备)中，将rSENP2稀释至1U/μL。
- 酶切与纯化：后续可以按照上述优化的反应条件，放大反应体系进行目的蛋白SUMO3标签的切除反应。反应结束后，可以通过镍柱结合去除切除下来的带有His标签的SUMO标签，以及带有His标签的本制品重组SENP2蛋白酶，从而获得高纯度的去除了SUMO标签的目的蛋白。也可以对于同时带有His标签的SUMO3标签的融合表达蛋白进行在柱酶切，即在镍柱或GST柱结合带有His标签的SUMO3标签的融合蛋白时，进行rSENP2 (His-tag)的酶切，酶切后如果镍柱容量足够，rSENP2(His-tag)和酶切下来的带有His标签的SUMO3标签都会结合在镍柱上，仅目的蛋白会被洗脱下来。
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